جداسازی و کلونینگ ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزا a (h۱n۱ سویهnew caledonia ) در وکتور بکمید به منظور ساخت باکیولوویروس نوترکیب
نویسندگان
چکیده
زمینه و هدف: در سالهای اخیر ویروس آنفلوانزا باعث عفونتهای متوسط تا شدید با میزان پراکندگی وسیع در سرتاسر دنیا شده است. بر این اساس، واکسن آنفلوانزایی که تنها یک دوز آن محافظت ایجاد نماید هنوز در دسترس نیست. بنابراین، تهیه یک واکسن عمومی و فراگیر بر اساس ذرات شبه ویروسی غیرتکثیری ایدهال می‌باشد. در تحقیق حاضر یکی از سازههای مولکولی برای ساخت این ذرات مد نظر قرار گرفته است. مواد و روشها: در این مطالعه تجربی، رده سلولی mdck برای تکثیر ویروس آنفلوانزای انسانی تیپ a/new caledonia h1n1 استفاده شد. سپس کل rna سلول، استخراج شده و با استفاده از پرایمر random hexamer به عنوان پرایمر عمومی cdna ساخته شد. قطعه (1413 bp)na با روش pcr تکثیر داده شد و در وکتور pbluescript sk کلون شد. سپس قطعه نورآمینیداز در پلاسمید pfastbac11 از طریق محلهای برش آنزیمی sali و xhoi سابکلون گردیده و صحت آن با توالییابی دو طرفه مورد تایید قرار گرفت. وکتور pfastbac1na به میزبان e.coli dh10bac که حاوی بکمید و پلاسمید کمکی بود منتقل شد تا بکمید نوترکیب نورآمینیداز ساخته شود. یافتهها: بکمید نوترکیب نورآمینیداز با روش نوترکیبی هومولوگ بین pfastbac1na و بکمید به وجود آمد. این محصول با استفاده از pcr و پرایمرهای اختصاصی نورآمینیداز و عمومی m13 تایید گردید. نتیجهگیری: از بکمید نوترکیب ساخته شده در این مطالعه به همراه بکمیدهای نوترکیب، حاوی سایر ژنهای ساختمانی ویروس، میتوان برای ساخت ذرات شبه ویروسی آنفلوانزا استفاده نمود و یا پروتئین حاصل از بیان این سازه را در سلولهای حشرات خالص نموده و در تحقیقات واکسن شناسی استفاده نمود.
منابع مشابه
نقش ژن نورآمینیداز در بیولوژی ویروس آنفلوانزا
نور آمینیداز جز گلیکوپروتئین های کلاس II است که انتهای آمینی آن در داخل ویریون و انتهای کربوکسیل آن در خارج قرار دارد. این گیلکوپروتئین توسط قطعه شش RNA کد می شود. این ژن حدود 1413 نوکلئوتید طول دارد و پروتئین حاصل از آن از 453 آمینواسید تشکیل شده است. عموما به ازای هر یک ملکول نورآمینیداز (NA ) در سطح ویروس پنج مولکول هماگلوتینین (HA ) قرار دارد اما این نسبت بین تحت تیپ های ویروس متفاوت است ن...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...
متن کاملجداسازی، کلونینگ وتعیین توالی ژن همآگلوتینین آنفلوآنزای a(h۱n۱) به منظور تهیه بانک ژن همآگلوتینین
زمینه هدف: آنفلوآنزا بیماری مسری عفونت دستگاه تنفسی است که در فصل های سرد سال شیوع پیدا می کند. شیوع ویروس جدید آنفلوآنزا a(h1n1) در سال 2009 که جمعیت کثیری از مردم جهان را درگیر کرد، مرگ و میر قابل توجهی در پیداشت. مولکول همآگلوتینین که اصلیترین گلیکوپروتئین سطحی ویروس آنفلوآنزا است، یکی از ارکان مهم در تهیه کیتهای تشخیصی و واکسن‌های موثر بر علیه این بیماری است. لذا تهیه بانک ژن سویه‌های شا...
متن کاملطراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری
زمینه و هدف: هاری (rabies) یک آنسفالیت حاد است که سالانه سبب مرگ بیش از 60.000 انسان در جهان می شود. تنها راه نجات بیماران استفاده ی به موقع از واکسن های کارآمد است. هدف از این مطالعه معرفی یک سیستم بیانی یوکاریوتی جدید به منظور بیان ژن نوکلئوپروتیین (n) ویروس هاری می باشد. این سیستم جهت ارزیابی و ساخت واکسن ضد هاری به کار می رود. روش بررسی: توالی کامل ژن n سویه pv ویروس هاری به روش reverse tra...
متن کاملطراحی و ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن Vpr ویروس نقص ایمنی اکتسابی انسانی (HIV) با استفاده از وکتور EGFP-N1
Background and purpose: The purpose of this study was to design a recombinant vector pEFGP- N1 containing the full length of HIV-1Vpr gene. To the best of our knowledge, the cloning of Vpr gene in pEGFP_N1 is not previously done. Materials and methods: As a source of Vpr gene the pUC19-Vpr recombinant vector was confirmed by digestion with restriction enzymes BglII and NotI in order to separ...
متن کاملبیان پروکاریوتی پروتئین کایمر سه تایی3M2e-HA2-NP حاصل از نواحی حفاظت شده پروتئینهای ویروس آنفلوانزای A/H1N1 در راستای دست یابی به واکسن زیر واحدی فراگیر
زمینه و هدف: ویروس آنفلوانزا A یک پاتوژن تنفسی مهم است که باعث بیماری و مرگ و میر گسترده در طول اپیدمی‌های فصلی و پاندمی ها می‌شود. واکسن‌های رایج آنفلوانزا توانایی ایجاد ایمنی مؤثر در برابر سویه‌های مختلف ویروس آنفلوانزا را ندارند. طراحی واکسن‌های فراگیر با استفاده از آنتی‌ژن‌های حفاظت شده‌ی ویروس آنفلوانزا در جهت رفع این محدودیت می‌باشد. ناحیه بیرونی پروتئین M2 آنفلوانزا (M2e)، ساقه هماگلوتی...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اراکجلد ۱۵، شماره ۵، صفحات ۵۸-۶۵
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023